Question

【題目】為實現(xiàn)目的基因與運載體結(jié)合，以便在大腸桿菌中大量表達相應的蛋白質(zhì)，研究人員進行了如圖所示操作。請分析回答下列問題：

（1）如圖表示用BamH I切割含目的基因的__________，質(zhì)粒經(jīng)相同限制酶處理后，經(jīng) ________酶的作用獲得a，a稱作_________。

（2）將a與感受態(tài)大腸桿菌混合后，混合物應接種在含有________的培養(yǎng)基上。質(zhì)粒中抗氨芐青霉素基因稱為______，在篩選過程起作用。若要證明培養(yǎng)基是否符合實驗要求，培養(yǎng)基上需接種________的感受態(tài)大腸桿菌，培養(yǎng)后不出現(xiàn)菌落則培養(yǎng)基合格。

（3）DNA分子中，一條鏈中的兩個核苷酸通過_________相連，已知堿性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸，構(gòu)建a的過程中用該酶處理質(zhì)粒，但目的基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是___________。

（4）如果要檢測目的基因是否成功表達，可采用________________的方法。

Answer 1

【答案】

（1）DNA片段（1分） DNA連接酶（1分） 基因表達載體（重組質(zhì)粒）（1分）

（2）氨芐青霉素 標記基因 未經(jīng)質(zhì)�；旌�

（3）磷酸二酯鍵 防止質(zhì)粒自我連接

（4）抗原—抗體雜交

【解析】

（1）圖表示用BamHI為限制性內(nèi)切酶，能識別特定的堿基序列，切割含目的基因的DNA片段，質(zhì)粒經(jīng)相同限制酶處理后，形成的黏性末端相同，經(jīng)DNA連接酶酶的作用獲得基因表達載體，也叫重組質(zhì)粒．

（2）由于質(zhì)粒中含有標記基因抗氨芐青霉素基因，故將重組質(zhì)粒與感受態(tài)大腸桿菌混合后，混合物應接種在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上．在篩選過程起作用，導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌能正常生活，而未導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌則不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生活．若要證明培養(yǎng)基是否符合實驗要求，需設置對照試驗，即培養(yǎng)基上需接種未經(jīng)質(zhì)粒混合的感受態(tài)大腸桿菌，培養(yǎng)后不出現(xiàn)菌落則培養(yǎng)基合格。

（3）DNA分子中，一條鏈中的兩個核苷酸通過磷酸二酯鍵相連；構(gòu)建a的過程中用該酶處理質(zhì)粒，但目的基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是使它們形成的黏性末端不同，防止質(zhì)粒自我連接。

（4）檢測目的基因是否成功表達，須提取培養(yǎng)后大腸桿菌的總蛋白，通過抗原--抗體雜交試驗，用相應抗體檢測。