Question

【題目】今年非洲豬瘟導(dǎo)致大量生豬死亡，通過(guò)克隆豬來(lái)給生豬養(yǎng)殖戶提供豬仔是一條值得探索的途徑。早期胚胎細(xì)胞異常凋亡是目前克隆豬成功概率較低的主要原因，Bcl-2基因是細(xì)胞調(diào)亡抑制基因，用PCR技術(shù)可以檢測(cè)該基因轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而了解該基因與不同胚胎時(shí)期細(xì)胞凋亡的關(guān)系�？寺∝i的培育及該基因轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)流程如圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題

（1）圖中應(yīng)選擇減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞進(jìn)行核移植，原因是_______________，為了保證正常的二倍體核型，使用的良種豬體細(xì)胞一般都選擇__________代以內(nèi)的細(xì)胞。

（2）圖中X過(guò)程使用的酶是_______________，用PCR擴(kuò)增Bcl-2基因。該技術(shù)的前提是要有一段已知__________________。根據(jù)這一序列設(shè)計(jì)合成引物，PCR擴(kuò)增過(guò)程中使用的酶是_______________。

（3）在PCR過(guò)程中可檢測(cè)出cDNA中Bcl-2cDNA的分子數(shù)，進(jìn)而計(jì)算總mRNA中Bcl-2的分子數(shù)，從而反映出_______________________。

（4）胚胎移植中，應(yīng)選擇有__________________的個(gè)體作為受體母豬，并對(duì)受體母豬進(jìn)行______處理。

Answer 1

【答案】減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞內(nèi)含有動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的全部信息及營(yíng)養(yǎng)，有助于動(dòng)物細(xì)胞核全能性的表達(dá) 10 逆轉(zhuǎn)錄酶(反轉(zhuǎn)錄酶) 核苷酸序列 Taq酶 Bcl-2基因的轉(zhuǎn)錄水平 健康體質(zhì)和正常繁殖能力 同期發(fā)情

【解析】

分析題圖：圖示為克隆豬的培育及該基因轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)流程圖，首先采用核移植技術(shù)，即將良種豬體細(xì)胞核移植到去核卵細(xì)胞中形成重組細(xì)胞；然后采用早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)和胚胎移植技術(shù)；X表示以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過(guò)程。

（1）減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞內(nèi)含有動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的全部信息及營(yíng)養(yǎng)，有助于動(dòng)物細(xì)胞核全能性的表達(dá)，所以選擇該時(shí)期的卵母細(xì)胞進(jìn)行核移植；由于10代以內(nèi)的細(xì)胞可保證正常的二倍體核型，因此使用的良種豬體細(xì)胞一般都選擇10代以內(nèi)的細(xì)胞。

（2）圖中X表示以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶；從基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢Bcl-2基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列設(shè)計(jì)合成引物用于PCR擴(kuò)增；PCR擴(kuò)增過(guò)程中由于是在高溫環(huán)境中進(jìn)行DNA的復(fù)制所以需要Taq酶。

（3）在PCR過(guò)程中可檢測(cè)出cDNA中Bcl-2cDNA的分子數(shù)，進(jìn)而計(jì)算總mRNA中Bcl-2mRNA的分子數(shù)，由于mRNA是通過(guò)轉(zhuǎn)錄形成的，因此這能反映出Bcl-2基因的轉(zhuǎn)錄水平。

（4）胚胎移植中，應(yīng)選擇有健康體質(zhì)和正常繁殖能力的個(gè)體作為受體母豬，并對(duì)受體母豬進(jìn)行同期發(fā)情處理。