Question

【題目】腸出血性大腸桿菌是能導致人體患病的為數(shù)不多的幾種大腸桿菌中的一種，人體感染該種大腸桿菌后的主要癥狀是出血性腹瀉，感染嚴重者可出現(xiàn)溶血性尿毒綜合征（HUS），危及生命。該大腸桿菌在血平板（培養(yǎng)基中添加適量血液）上生長時，可破壞菌落周圍的紅細胞，使其褪色，從而形成透明圈。下圖為從被腸出血性大腸桿菌污染的食物中分離和提純該大腸桿菌的操作流程示意圖。請回答下列相關問題：

（1）肉湯培養(yǎng)基可為培養(yǎng)的微生物提供的營養(yǎng)成分包括________________________。

（2）以上操作中在血平板上的接種方法是________________；第一次接種操作前和整個接種操作結束后均需要對接種工具進行灼燒滅菌，其目的分別是________和________。

（3）為了進一步研究該大腸桿菌的抗原性，常利用________法分離其蛋白質，若甲蛋白質比乙蛋白質后洗脫出來，則相對分子質量較大的是________。在裝填凝膠柱時，不得有氣泡產(chǎn)生，是因為________________。

Answer 1

【答案】碳源、氮源、水、無機鹽等 平板劃線法 殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)基（滅菌） 避免污染環(huán)境和感染操作者 凝膠色譜 乙蛋白質 氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫順序降低分離效果

【解析】

凝膠色譜法（分配色譜法）：①原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動慢。②凝膠材料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。③分離過程：混合物上柱→洗脫→大分子流動快、小分子流動慢→收集大分子→收集小分子，洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質分子的差速流動。④作用： 分離蛋白質，測定生物大分子分子量，蛋白質的脫鹽等。

（1）肉湯培養(yǎng)基是天然培養(yǎng)基，可為培養(yǎng)的微生物提供的營養(yǎng)成分包括碳源、氮源、水、無機鹽等。

（2）圖示中用到了接種環(huán)從液體培養(yǎng)基中接種到固體培養(yǎng)基中，因此在血平板上的接種方法是平板劃線法。第一次接種操作前對接種工具進行灼燒滅菌，其目的是殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)基（滅菌），整個接種操作結束后對接種工具進行灼燒滅菌，其目的是避免污染環(huán)境和感染操作者。

（3）為了進一步研究該大腸桿菌的抗原性，常利用凝膠色譜法分離其蛋白質。分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快，若甲蛋白質比乙蛋白質后洗脫出來，則相對分子質量較大的是乙蛋白質。在裝填凝膠柱時有氣泡產(chǎn)生，就會在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動次序，影響分離的效果。