Question

【題目】 人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)在羊乳中獲得。流程如下：

（1）上述基因工程中，目的基因是_______；在重組表達(dá)載體中有一段特殊的DNA片段，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，這段DNA被稱(chēng)為_____�；�因工程所用DNA連接酶有兩類(lèi)，其中只能連接黏性末端的是________DNA連接酶。

（2）常采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，在此過(guò)程中，由于DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA單鏈，只能從_____端延伸DNA單鏈，因此需要加入引物。

（3）成熟的基因表達(dá)載體除了含有目的基因外，還必須有啟動(dòng)子、終止子以及________________等。

（4）如果將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，一般要用_________處理該菌，使之成為_____________細(xì)胞，以便吸收周?chē)�環(huán)境中的DNA分子。

（5）科研人員通過(guò)_____法，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入豬的受精卵中�？赏ㄟ^(guò)______技術(shù)，來(lái)檢測(cè)目的基因是否已導(dǎo)入到豬受精卵細(xì)胞的DNA分子上。

（6）在操作中要對(duì)供體母羊注射__________進(jìn)行超數(shù)排卵處理；應(yīng)采用____________法使精子體外獲能；對(duì)供體母羊和__________進(jìn)行同期發(fā)情處理。該轉(zhuǎn)基因母羊進(jìn)入泌乳期后，可以通過(guò)分泌的乳汁來(lái)生產(chǎn)htPA，因而被稱(chēng)為________________。

（7）為了獲得含有htPA的羊乳，在移植前取早期胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行_____________。

Answer 1

【答案】人組織纖溶酶原激活物基因(或htPA基因） 啟動(dòng)子 Ecoli 3’ 標(biāo)記基因 鈣離子 感受態(tài) 顯微注射 DNA分子雜交 促性腺激素 化學(xué)誘導(dǎo)(或化學(xué)） 代孕母羊(受體母羊） 乳腺生物反應(yīng)器(或乳房生物反應(yīng)器） 性別鑒定

【解析】

目的基因分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因：DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA：分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原-抗體雜交技術(shù)。該基因工程需要對(duì)羊的性別進(jìn)行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進(jìn)行移植。

（1）人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)在羊乳中獲得，所以基因工程中，目的基因是人組織纖溶酶原激活物基因，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄�；�因工程所用DNA連接酶有兩類(lèi)，其中只能連接黏性末端的是EcoliDNA連接酶。
（2）在PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，由于DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA單鏈，只能從3’端延伸DNA單鏈，因此需要加入引物。
（3）成熟的基因表達(dá)載體除了含有目的基因外，還必須有啟動(dòng)子、終止子以及標(biāo)記基因。
（4）如果將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，一般要用鈣離子處理該菌，使之成為感受態(tài)細(xì)胞，以便吸收周?chē)�環(huán)境中的DNA分子。
（5）將基因表達(dá)載體導(dǎo)入豬的受精卵中，常用顯微注射法。檢測(cè)目的基因是否已導(dǎo)入到豬受精卵細(xì)胞的DNA分子上，常用DNA分子雜交技術(shù)。
（6）為了獲取更多的卵子，需要使用促性腺激素對(duì)母羊進(jìn)行超數(shù)排卵處理，采用化學(xué)誘導(dǎo)的方法使精子獲能，胚胎移植前需要供體母羊和代孕母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，目的是為供體胚胎的移入提供相同的生理環(huán)境。轉(zhuǎn)基因母羊進(jìn)入泌乳期后，可以通過(guò)分泌的乳汁來(lái)生產(chǎn)htPA，因而被稱(chēng)為乳腺生物反應(yīng)器。
（7）為了獲得母羊，移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定。