Question

【題目】下圖四種質(zhì)粒含有E1和E2兩種限制酶的識別位點，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。

（1）基因工程中使用的限制酶，其特點是____________________________________ 。

（2）將兩端用E1切開的Tcr 基因與用E1切開的質(zhì)粒X-1混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有______________（可多選）。

A．X-1 B.X-2 C.X-3 D.X-4

（3）將上圖所示四種質(zhì)粒導入大腸桿菌，然后分別涂布在含有青霉素或四環(huán)素的兩種培養(yǎng)基上。在這兩種培養(yǎng)基上均不能生長的大腸桿菌細胞類型有 ___________、____________。

（4）若將外源的Tcr 基因兩端用E2切開，再與用E2切開的X-1混合連接，并導入大腸桿菌細胞，結(jié)果顯示，含X-4的細胞數(shù)與含X-1的細胞數(shù)之比為1:3，增大DNA連接酶用量能否提高上述比值？ _______ ，原因是________________________________________。

Answer 1

【答案】特異性地識別和切割DNA A B C 無質(zhì)粒細胞 含X-3的細胞 不能 DNA連接酶對DNA片段沒有選擇性（兩段DNA末端相同）

【解析】

基因工程的工具：限制酶、DNA連接酶和運載體。

基因工程的操作步驟：目的基因的獲取、構(gòu)建基因表達載體、把目的基因?qū)�入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定。

（1）限制酶的特點：能特異性的識別特定的核苷酸序列，并在特定的位點切割。

（2）將兩端用E1切開的Tcr 基因與用E1切開的質(zhì)粒X-1混合連接，可能會出現(xiàn)質(zhì)粒上2個E1切開的黏性末端相連如X-3，也可能出現(xiàn)切下的青霉素抗性基因與切點重連成X-3，也可能出現(xiàn)質(zhì)粒與四環(huán)素抗性基因連接如X-2。故選ABC。

（3）X-1可以在含青霉素的培養(yǎng)基上生活；X-2指可以在四環(huán)素的培養(yǎng)基上生活；X-3無抗性基因，不能在含青霉素或四環(huán)素的培養(yǎng)基上生活；X-4含兩種抗性基因，可以在含青霉素或四環(huán)素的培養(yǎng)基上生活。故不能在含四環(huán)素或青霉素的培養(yǎng)基上生活的細胞是不含質(zhì)粒的細胞，或含X-3的細胞。

（4）因為DNA連接酶對DNA片段沒有選擇性，故增大DNA連接酶用量也不能提高含X-4的細胞數(shù)與含X-1的細胞數(shù)之比。