Question

【題目】中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO細(xì)胞）能夠高效表達(dá)外源基因�？茖W(xué)研究中常使用重組CHO細(xì)胞（導(dǎo)入了重組載體的CHO細(xì)胞）大量生產(chǎn)外源蛋白，一般步驟為：Ⅰ.長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)，獲得大量重組細(xì)胞；Ⅱ.批式培養(yǎng)，獲得大量外源蛋白。

（1）體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的基本培養(yǎng)液（BM）中除抗生素和一般營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)含有_______。為了獲得能生產(chǎn)抗體A的重組 CHO 細(xì)胞，需要將含有抗體A基因的重組載體通過________法導(dǎo)入CHO細(xì)胞，經(jīng)篩選獲得重組CHO 細(xì)胞。

（2）研究發(fā)現(xiàn)，酵母抽提物（YE）在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和促進(jìn)蛋白質(zhì)表達(dá)中具有重要作用。為確定YE在不同培養(yǎng)階段的使用策略，研究人員進(jìn)行了下列實(shí)驗(yàn)。

①圖1所示實(shí)驗(yàn)探究了在長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)階段________對(duì)重組CHO細(xì)胞增殖以及抗體A表達(dá)量的影響。通過細(xì)胞計(jì)數(shù)和計(jì)算得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，結(jié)果說明________。此處理對(duì)后續(xù)批式培養(yǎng)中的細(xì)胞增殖及單個(gè)細(xì)胞的抗體產(chǎn)量基本無影響。

②進(jìn)一步探究YE對(duì)批式培養(yǎng)階段的影響，應(yīng)在階段Ⅰ、Ⅱ分別使用___________和________進(jìn)行培養(yǎng)。結(jié)果表明，抗體A的總產(chǎn)量隨著 YE 濃度的提高而增加。

③綜上所述，為提高抗體A的總產(chǎn)量，整個(gè)培養(yǎng)過程中對(duì)YE的使用策略是________。

Answer 1

【答案】 動(dòng)物血清 顯微注射 不同濃度的YE 較低濃度YE促進(jìn)細(xì)胞增殖，較高濃度YE抑制細(xì)胞增殖 BM 添加不同濃度YE的BM 傳代培養(yǎng)過程中添加低濃度YE，批式培養(yǎng)過程中添加高濃度YE

【解析】試題分析：本題考查基因工程、細(xì)胞工程，考查對(duì)基因工程操作步驟、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件的理解。解答此題，可根據(jù)不同培養(yǎng)階段YE作用的不同特點(diǎn)選擇提高抗體A的總產(chǎn)量的策略。

（1）體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的基本培養(yǎng)液（BM）中除抗生素和一般營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，一般加入動(dòng)物血清，以滿足細(xì)胞生命活動(dòng)的需要。將重組載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞，一般選用顯微注射法。

（2）①圖1所示實(shí)驗(yàn)不同組實(shí)驗(yàn)的自變量是YE的不同濃度，探究的是在長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)階段不同濃度的YE對(duì)重組CHO細(xì)胞增殖以及抗體A表達(dá)量的影響。根據(jù)圖2可知，長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)階段YE濃度為1g/L時(shí)細(xì)胞數(shù)目最多，較低濃度YE促進(jìn)細(xì)胞增殖，較高濃度YE抑制細(xì)胞增殖。

②圖1所示實(shí)驗(yàn)探究了在長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)階段不同濃度的YE對(duì)重組CHO細(xì)胞增殖以及抗體A表達(dá)量的影響，探究YE對(duì)批式培養(yǎng)階段的影響，可將圖示1培養(yǎng)步驟顛倒，應(yīng)在階段Ⅰ使用BM進(jìn)行培養(yǎng)，在階段Ⅱ添加不同濃度YE的BM。

③長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)階段YE濃度為1g/L時(shí)細(xì)胞數(shù)目最多，較低濃度YE促進(jìn)細(xì)胞增殖，較高濃度YE抑制細(xì)胞增殖，該處理對(duì)后續(xù)批式培養(yǎng)中的細(xì)胞增殖及單個(gè)細(xì)胞的抗體產(chǎn)量基本無影響；批式培養(yǎng)階段抗體A的總產(chǎn)量隨著 YE 濃度的提高而增加，因此為提高抗體A的總產(chǎn)量，可在傳代培養(yǎng)過程中添加低濃度YE，批式培養(yǎng)過程中添加高濃度YE。