Question

【題目】請根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答下列問題：

（1）將實驗流程按先后順序補充完整：_______________、_______________。

（2）凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)_______________________分離蛋白質。

（3）洗滌紅細胞的目的是去除______________,洗滌干凈的標志是_____________________。為防止血液凝固，在采血容器中通常要預先加入____________（抗凝劑）。

（4）下圖是凝膠色譜法分離血紅蛋白時樣品加入過程的示意圖,正確的加樣順序是________。

（5）在凝膠色譜操作過程中，一旦發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象，解決的辦法是：___________________。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 凝膠色譜柱的裝填 相對分子質量的大小 去除雜蛋白 離心后的上清液不再呈現(xiàn)黃色 檸檬酸鈉 ④①②③ 重新裝填凝膠色譜柱

【解析】

凝膠色譜法（分配色譜法）：

（1）原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內部，路程長，流動慢。

（2）步驟：血紅蛋白的提取和分離流程為：紅細胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析→凝膠色譜柱的制作→凝膠色譜柱的裝填→樣品的加入和洗脫。

（1）根據(jù)分析，血紅蛋白的提取步驟：紅細胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析→凝膠色譜柱的制作→凝膠色譜柱的裝填→樣品的加入和洗脫。

（2）凝膠色譜法的原理是根據(jù)相對分子質量的大小分離蛋白質。

（3）洗滌紅細胞的目的是去除雜蛋白，以利于后續(xù)步驟的分離純化；洗滌干凈的標志是離心后的上清液不再呈現(xiàn)黃色；為防止血液凝固，在采血容器中要預先加入抗凝血劑檸檬酸鈉，其比例是每100mL血液加入3.0g檸檬酸鈉。

（4）加樣順序是調整緩沖液面、滴加透析樣品、樣品滲入凝膠床、再調整緩沖液面，即④①②③。

（5）如果發(fā)生洗脫液流干的現(xiàn)象，需要重新裝填凝膠色譜柱。