Question

【題目】凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離技術(shù)，由于設(shè)備簡單、操作方便，不需要有機(jī)溶劑，對高分子物質(zhì)有很高的分離效果，目前已經(jīng)被生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、分子免疫學(xué)以及醫(yī)學(xué)等有關(guān)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，不但應(yīng)用于科學(xué)實驗研究，而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。據(jù)圖回答問題：

（1）a、b均為蛋白質(zhì)分子，其中先從色譜柱中洗脫出來的是________，原因是______________________________________。

（2）自己制作凝膠色譜柱時，在色譜柱底部d位置相當(dāng)于多孔板的結(jié)構(gòu)可由______________替代。

（3）裝填凝膠色譜柱時，色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，原因是__________________。

（4）若選用SephadexG－100，則“G”表示____________________，100表示___________________________。

（5）洗脫用的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體________(填“相同”或“不同”)，洗脫時，對洗脫液的流速要求是__________________。

Answer 1

【答案】a a相對分子質(zhì)量大，無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快 尼龍網(wǎng)和尼龍紗 氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 凝膠的交聯(lián)程度、膨脹程度及分離范圍 凝膠吸水值，即每克凝膠膨脹時吸水100g 相同 保持穩(wěn)定

【解析】

血紅蛋白的提取和分離：

1、實驗原理：蛋白質(zhì)的物化理性質(zhì)：形狀、大小、電荷性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)、親和力等千差萬別，由此提取和分離各種蛋白質(zhì)。

（1）凝膠色譜法（分配色譜法）：①原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動慢。②凝膠材料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。

③分離過程：混合物上柱→洗脫→大分子流動快、小分子流動慢→收集大分子→收集小分子
洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動。④作用： 分離蛋白質(zhì)，測定生物大分子分子量，蛋白質(zhì)的脫鹽等。

（2）緩沖溶液：①原理：由弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿弱酸鹽組成（如H2CO3—NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4等），調(diào)節(jié)酸和鹽的用量，可配制不同pH的緩沖液。②緩沖液作用：抵制外界酸、堿對溶液pH的干擾而保持pH穩(wěn)定。

(3）凝膠電泳法：①原理：不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場中的運(yùn)動方向和運(yùn)動速度不同。②分離方法：瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。③分離過程：在一定pH下，使蛋白質(zhì)基團(tuán)帶上正電或負(fù)電；加入帶負(fù)電荷多的SDS，形成“蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物”，使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于分子大小。

（1）a、b均為蛋白質(zhì)分子，a相對分子質(zhì)量大，無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快，故a先從色譜柱中洗脫出來。

（2）自己制作凝膠色譜柱時，在色譜柱底部d位置相當(dāng)于多孔板的結(jié)構(gòu)可由尼龍網(wǎng)和尼龍紗等材料替代。

（3）凝膠色譜柱內(nèi)有氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果，故裝填凝膠色譜柱時，色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在。

（4）SephadexG－100，“G”表示凝膠的交聯(lián)程度、膨脹程度及分離范圍；100表示凝膠吸水值，即每克凝膠膨脹時吸水100g。

（5）洗脫用的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體相同，洗脫時，對洗脫液的流速要求是保持穩(wěn)定。