Question

17．Graves�。℅D）可導(dǎo)致甲狀腺功能亢進(jìn)．研究發(fā)現(xiàn)，GD患者甲狀腺細(xì)胞表面表達(dá)大量細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1），導(dǎo)致甲狀腺腫大．科研人員通過(guò)制備單克隆抗體，對(duì)治療GD進(jìn)行了嘗試．
（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養(yǎng)板的不同孔中，多孔培養(yǎng)板中需加入ICAM-1以檢測(cè)這些小鼠產(chǎn)生的抗體．依據(jù)反應(yīng)結(jié)果，選出陽(yáng)性反應(yīng)最強(qiáng)的培養(yǎng)孔所對(duì)應(yīng)的小鼠M．
（2）實(shí)驗(yàn)用骨髓瘤細(xì)胞置于（5%）CO₂恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)，融合前將部分培養(yǎng)細(xì)胞置于含HAT的選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后培養(yǎng)基中無(wú)（填“有”或“無(wú)”）骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基符合實(shí)驗(yàn)要求．
（3）取小鼠M的脾臟細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，與實(shí)驗(yàn)用骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，用選擇培養(yǎng)基篩選得到具有無(wú)限增殖能力的細(xì)胞．將獲得的上述細(xì)胞在多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，用ICAM-1檢測(cè)，從中選擇大量產(chǎn)生抗ICAM-1抗體的雜交瘤細(xì)胞，植入小鼠腹腔中克隆化培養(yǎng)，一段時(shí)間后從小鼠腹水中提取實(shí)驗(yàn)用抗體．
（4）若進(jìn)一步比較實(shí)驗(yàn)用抗體和¹³¹I對(duì)GD模型小鼠的治療作用，可將若干GD模型小鼠等分為三組，請(qǐng)補(bǔ)充下表中的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)．

對(duì)照組（A）	131I治療組（B）	單克隆抗體治療組（C）
給GD模型小鼠腹腔注射0.1mL無(wú)菌生理鹽水	給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無(wú)菌生理鹽水的131I	給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無(wú)菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體

Answer 1

分析 1、單克隆抗體：由單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖形成的細(xì)胞系所產(chǎn)生出的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體．具有特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可能大量制備的特點(diǎn)．
2、單克隆抗體的制備過(guò)程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞．利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，單克隆抗體制備過(guò)程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，即AB型細(xì)胞（A為B淋巴細(xì)胞，B為骨髓瘤細(xì)胞），不需要A、B、AA、BB型細(xì)胞．第二次篩選：利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞．

解答 解：（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養(yǎng)板的不同孔中，多孔培養(yǎng)板中需加入ICAM-1以檢測(cè)這些小鼠產(chǎn)生的抗體．依據(jù)反應(yīng)結(jié)果，選出陽(yáng)性（或“抗原-抗體”）反應(yīng)最強(qiáng)的培養(yǎng)孔所對(duì)應(yīng)的小鼠M．
（2）實(shí)驗(yàn)用骨髓瘤細(xì)胞置于（5%）CO₂恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)，融合前將部分培養(yǎng)細(xì)胞置于含HAT的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時(shí)間后培養(yǎng)基中無(wú)骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基符合實(shí)驗(yàn)要求．
（3）取小鼠M的脾臟細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，與實(shí)驗(yàn)用骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，用選擇培養(yǎng)基篩選得到具有無(wú)限增殖能力的細(xì)胞．將獲得的上述細(xì)胞在多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，用ICAM-1檢測(cè)，從中選擇大量產(chǎn)生抗ICAM-1 抗體的雜交瘤細(xì)胞，植入小鼠腹腔中克隆培養(yǎng)，一段時(shí)間后從小鼠腹水中提取實(shí)驗(yàn)用抗體．
（4）根據(jù)題干中實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹氨容^實(shí)驗(yàn)用抗體和¹³¹I對(duì)GD 模型小鼠的治療作用”，單克隆抗體治療組（C）中應(yīng)給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無(wú)菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體．
故答案為：
（1）ICAM-1    陽(yáng)性（或“抗原-抗體”）
（2）（5%）CO₂    無(wú)
（3）無(wú)限增殖      抗ICAM-1抗體    克隆化
（4）給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無(wú)菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體

點(diǎn)評(píng) 本題考查了單克隆抗體的制備以及動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記單克隆抗體制備的過(guò)程，掌握兩次篩選的方法原理，并能夠利用對(duì)照實(shí)驗(yàn)的原則對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行補(bǔ)充設(shè)計(jì)，難度適中．